Soutenance de thèse de Rocio VACIK DIAZ

Le test de génération de thrombine (TGT) est un examen global de la coagulation qui évalue la capacité du plasma à produire de la thrombine au cours du temps, offrant ainsi une vue d'ensemble de l'équilibre hémostatique d'un individu. L'objectif de cette étude était d'identifier de nouveaux déterminants biologiques de la génération de thrombine en utilisant une approche multi-omique. Les associations entre les paramètres du TGT et les niveaux plasmatiques 236 protéines candidates (ciblées par 377 anticorps) liées au risque cardiovasculaire ont été examinées au moyen d'une analyse de régression linéaire multiple dans un sous-groupe de 770 individus atteints de maladie thrombo-embolique de l'étude MARTHA. Dix-huit protéines étaient associées (p<1,33x10-4) à au moins trois paramètres du TGT chez les sujets de l'étude MARTHA, dont 13 ont présenté des associations similaires dans une population indépendante d'individus en bonne santé (EFS-AM). Les protéines du complément C5 et C9 présentaient les associations les plus marquées dans les deux groupes. La supplémentation ex vivo du plasma appauvri en plaquettes de volontaires en bonne santé avec de la protéine C9 purifiée a eu un effet significatif dose-dépendant sur les paramètres de génération de thrombine, tandis qu'aucun effet n'a été observé lors de la supplémentation avec de la protéine C5 purifié. Plusieurs variants génétiques associées aux niveaux plasmatiques de C5 et C9 ont été identifiés. La plus forte association concernait le variant faux-sens rs17611 du gène C5. En effet, l'allèle mineur du rs17611 était associé à une diminution des niveaux de C5, de l’aire sous la courbe du thrombogramme et du pic de génération de thrombine dans l'étude MARTHA. Si l'association entre le rs17611 et les niveaux de C5 a été confirmée dans la population EFS-AM, aucune association avec les paramètres du TGT n'a été observée. En conclusion, notre étude a identifié les protéines du complément C5 et C9 comme des facteurs importants influençant la génération de thrombine. Ces résultats, ainsi que ceux qui concernent les autres protéines associées de manière significative, méritent des investigations épidémiologiques et expérimentales ultérieures.

  Abstract The thrombin generation assay (TGA) is a global coagulation assay that measures the potential of plasma to generate thrombin over time, providing a global picture of an individual's hemostatic balance. This work aimed to identify novel biological determinants of thrombin generation using a multi-omics approach. Associations between TGA parameters and plasma levels of 377 antibodies targeting 236 unique candidate proteins for cardiovascular risk were tested using multiple linear regression analysis in 770 individuals with venous thrombosis from the MARTHA study. Eighteen proteins were associated (p<1.33x10-4) with at least three TGA parameters in MARTHA subjects, among which 13 demonstrated a similar pattern of associations in an independent population of healthy individuals (EFS-AM). Complement proteins C5 and C9 were found to have the strongest associations in both groups. Ex vivo supplementation of platelet-poor plasma from healthy volunteers with purified C9 protein had a significant dose-dependent effect on thrombin generation parameters whereas no effect was observed when supplemented with purified C5. We identified several single nucleotide polymorphisms associated with C5 and C9 plasma levels. The strongest association was for the C5 missense variant rs17611, which was associated with a decrease in C5 levels, ETP and Peak in MARTHA. No association of this variant with TGA parameters was observed in EFS-AM population. In conclusion, this study identified complement proteins C5 and C9 as important factors influencing thrombin generation. Fine mapping of these findings deserves further epidemiological and experimental investigations.