Soutenance de thèse de VLAD GARIBOLDI

L’adénosine est un dérivé de l’ATP, qui contrôle le système cardiovasculaire via l’activation de récepteurs couplés à une protéine G, dont ’il existe 4 sous types A1R, A2AR, A2BR et A3R. L’activation des A1 et A3Rs conduit à une inhibition de la production d’AMPc dans les cellules cibles, tandis que celle des A2Rs conduit à une production d’AMPc. L’activation des A1Rs a un effet chronotrope, dromotrope et bathmotope négatifs, tandis que l’activation des A2Rs induit une vasodilatation dans le territoire coronaire. Ainsi, l’adénosine et ses récepteurs sont impliqués dans le flux coronaire principalement via les récepteurs A2A. Dans un premier travail nous avons évalué le profil adénosinergique (ie:concentration en adénosine plasmatique, niveau d’expression des A2ARs et production d’AMPc) chez des patients(n=20) coronariens sévères devant subir un pontage coronarien. Le niveau d’expression des A2ARs des PBMCs ainsi que la production d’AMPc en présence d’un agoniste est plus faible chez les patients vs les témoins. Nous concluons que les PBMCs sont un excellent modèle pour l’étude du profil pharmacologique des A2ARs chez le coronarien. L’ischémie coronaire peut être suspectée par des tests non invasifs comme l’épreuve d’effort. Dans un deuxième travail, nous avons évalué le profil pharmacologique des A2ARs chez des patients suspects de coronaropathie et explorés lors d’une épreuve d’effort (n=34). Grâce à un anticorps monoclonal élaboré au laboratoire, et ayant des propriétés agonistes, nous avons pu dans le même temps mesurer le niveau d’expression des récepteurs, l’affinité de cet anticorps (KD) ainsi que la production d’AMPc (EC50 qui représente la moitié de la production maximale d’AMPc en présence de concentrations croissante d’anticorps). Alors que chez le sujet sain, ou le patient ayant une épreuve d’effort négative (n=17), la valeur du KD << EC50, c’est inverse qui est observé chez les patients (n=17) ayant une épreuve d’effort positive. Ce profil pharmacologique avec EC50<

Thesis resume

Adenosine is a ATP derivative, which controls the cardiovascular system via the activation of G protein-coupled receptors, namely A1R, A2AR, A2BR and A3R. Activation of A1 or A3Rs leads to inhibition of cAMP production in target cells, whereas that of A2Rs leads to cAMP production. Activation of A1Rs leads to negative chronotropic, dromotropic and bathmotopic effects, whereas activation of A2Rs leads to vasodilatation in coronary territories. Adenosine and its receptors are involved in coronary blood flow mainly via A2ARs. We show that mean plasma adenosine level was higher in patients vs controls. Moreover, there is a correlation between the expression level of A2ARs on PBMCs, evaluated by western blot, and those expressed by the coronary tissues. The expression level of A2ARs on PBMCs as well as the production of cAMP in the presence of an agonist were significantly lower in patients vs controls. The elevation of adenosinaemia is attributed to myocardial ischemia. We conclude that PBMCs are a useful tool for studying the pharmacological profile of A2ARs in coronary arteries. Coronary ischemia is somtime detectable via exercise stress testing (EST). In a second study, we compared the pharmacological profile of A2ARs expressed by PBMCs in 2 groups of suspected coronary artery disease patients; those with a positive EST , n=17) vs those with a negative EST (n=17). Using a monoclonal antibody developed in the laboratory, and having agonist properties, we were able at the same time to measure the expression level (by western blot), the affinity of this antibody (KD) as well as the production of cAMP (EC50 which represents half of the maximum production of cAMP in the presence of increasing concentrations of antibody). In the healthy subjects, or the EST- patients, the KD << EC50 value ; conversely, in EST+ patients EC50 was <

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