Soutenance de thèse de DAVID Hélène
Titre de thèse
Mise en œuvre de complexes enzymatiques et de cocultures en vue de produire de l'acide lactique par voie biologique à partir de biomasse lignocellulosique
Use of enzyme complexes and cocultures to produce lactic acid biologically from lignocellulosic biomass
Résumé de la thèse
Mon sujet de thèse s'inscrit dans le projet européen Cell4Chem financé dans l'appel EraCoBiotech 2021. Le but de ce projet est de développer un consortium bactérien capable de produire des carboxylates à chaîne moyenne (tels que le caproate et le caprylate) à partir de biomasse lignocellulosique (ou BLC) par fermentation. La cellulose est le polysaccharide le plus abondant de la BLC (30-50%). Elle est constituée uniquement d'unités glucose mais est un polysaccharide très récalcitrant à la dégradation du fait de sa structure cristalline. Trois étapes clés sont distinguées dans cette bioproduction anaérobie. La première étape est l'hydrolyse des polysaccharides de la BLC, dont la cellulose, en sucres fermentescibles. Ensuite, les sucres libérés sont fermentés produisant, entre autres, du lactate. Enfin, le lactate produit est utilisé par une souche capable de produire les carboxylates à chaîne moyenne par un procédé d'élongation de chaîne. Deux étapes sont considérées comme limitantes dans le projet : l'hydrolyse de la cellulose et la production de lactate qui est indispensable à l'élongation de chaîne. Notre partie se focalise principalement sur l'hydrolyse de la cellulose. Deux aspects ont été développés au cours de ma thèse : (i) tester plusieurs combinaisons de cellulases recombinantes in vitro au sein de minicellulosomes. L'objectif de cette première étude est de faire produire, de manière hétérologue, les meilleures combinaisons obtenues par la souche L. cremoris NZ9000 ; (ii) utiliser le modèle bactérien étudié au laboratoire, Ruminiclostridium cellulolyticum, en coculture anaérobie avec L. cremoris pour produire du lactate à partir de BLC.
Thesis resume
My thesis is part of the European Cell4Chem project funded under the Era CoBiotech 2021 call. The aim of this project is to develop a bacterial consortium capable of producing medium-chain carboxylates (such as caproate and caprylate) from lignocellulosic biomass (or BLC) by fermentation. Cellulose is the most abundant polysaccharide in BLC (30-50%). It consists solely of glucose units, but is a polysaccharide that is highly resistant to degradation due to its crystalline structure. Three key stages can be distinguished in this anaerobic bioproduction. The first is the hydrolysis of BLC polysaccharides, including cellulose, into fermentable sugars by a (hemi)cellulolytic strain. The released sugars are then fermented producing, among other things, lactate. Finally, the lactate produced is used by a strain capable of producing medium-chain carboxylates by a chain elongation process. Our part mainly focuses on cellulose hydrolysis. Two aspects were developed during my thesis: (i) testing several combinations of recombinant cellulases in vitro within minicellulosomes. The aim of this first study is to have the best combinations heterologously produced by the L. cremoris NZ9000 strain ; (ii) using the bacterial model studied in the laboratory, Ruminiclostridium cellulolyticum, in anaerobic coculture with L. cremoris to produce lactate from BLC.