Ecole Doctorale
Sciences de la Vie et de la Santé
Spécialité
Biologie-Santé - Spécialité Pathologie Vasculaire et Nutrition
Etablissement
Aix-Marseille Université
Mots Clés
intracellulaire,plaquettes,signalisation,cytométrie,
Keywords
cytometry,intracellular,pathway,platelets,
Titre de thèse
Apport de la cytométrie de flux intracellulaire à létude de la signalisation intra-plaquettaire
Contribution of intracellular flow cytometry to the study of intraplatelet signalling
Date
Mercredi 2 Décembre 2020 à 15:00
Adresse
27 Boulevard Jean Moulin, 13385 Marseille 1
Jury
Directeur de these |
Mme Marie-christine ALESSI |
CHU MARSEILLE |
CoDirecteur de these |
M. Matthias CANAULT |
Centre de recherche en Cardiovasculaire et nutrition |
|
M. Fabrice MALERGUE |
Immunotech Beckman Coulter |
Rapporteur |
Mme Chloé JAMES |
CHU Bordeaux |
Résumé de la thèse
Une fois dans la circulation les plaquettes se lient entre elles et à la paroi du vaisseau endommagé afin
d'éviter une perte excessive de sang. Les désordres plaquettaires exposent à un risque de saignement ou
de thrombose selon que leur capacité à sactiver est basse ou élevée.
Les pathologies plaquettaires quantitatives (thrombopénie) sont facilement détectables par les automates
à numération disponibles dans les laboratoires danalyses médicales. Par contre le diagnostic différentiel
entre une cause héréditaire (origine médullaire) ou immunologique (destruction périphérique) peut
savérer difficile. Cette complexité est source derrance diagnostique, de prise en charge inadaptée et de
mauvaise évaluation du pronostic. Les défauts plaquettaires qualitatifs (thrombopathies) sont de
diagnostic difficile. Contrairement aux thrombopénies il n'y a pas de test automatisé et simple pour les
authentifier. Une grande partie de ces déficits reste méconnue et expose à un risque hémorragique en
situation chirurgicale ou traumatique. Reconnaitre et caractériser les causes moléculaires des
pathologies plaquettaires héréditaires et mettre au point des méthodes de diagnostic rapide sont de
véritables challenges de santé. Notre travail a utilisé une technique simple et rapide développée par
le laboratoire Beckman pour détecter les antigènes dans les globules rouges et les plaquettes à
partir de sang total. Cette nouvelle méthode est robuste, avec une excellente précision intra-
essai. Elle permet une bonne stabilité des cellules et du marquage jusqu'à 24 heures sans besoin
de fixation. Nous avons montré la capacité de cette technique à détecter des protéines
membranaires et solubles des granules α plaquettaires. Nous avons confirmé que la lignée cellulaire
HEL pouvait être induite vers une différenciation mégacaryocytaire. Grâce au protocole mis en place
nous avons mis en évidence à la fois les marqueurs de surface mais également la diminution de
lexpression de la protéine MYH10 dans ces cellules au cours de leur différenciation.
Thesis resume
Once in the circulation, platelets bind to each other and to the damaged vessel wall to prevent
excessive blood loss. Platelet disorders expose patients to a risk of bleeding or thrombosis
depending on whether their ability to activate is low or high. Quantitative platelet pathologies
(thrombocytopenia) are easily detected by the automatic counting machines available in
medical analysis laboratories. On the other hand, differential diagnosis between a hereditary
(central origin) or immunological (peripheral destruction) cause can be difficult. This
complexity is a source of erroneous diagnosis, inappropriate management and poor prognosis
assessment. Qualitative platelet defects (thrombopathies) are difficult to diagnose. Unlike
thrombocytopenia, there is no simple automated test to authenticate them. A large part of these
deficits remains unknown and exposes to a risk of bleeding in surgical or traumatic situations.
Recognizing and characterizing the molecular causes of hereditary platelet pathologies and
developing rapid diagnostic methods are real health challenges. Our work used a simple and
rapid technique developed by the Beckman laboratory to detect antigens in red blood cells and
platelets from whole blood. This new method is robust, with excellent intra-assay precision. It
allows good cell stability and labeling for up to 24 hours without the need for fixation. We have
demonstrated the ability of this technique to detect membrane and soluble proteins from α
platelet granules. We confirmed that the HEL cell line could be induced towards megakaryocyte
differentiation. Thanks to the established protocol we highlighted both the surface markers but
also the decrease of MYH10 protein expression in these cells during their differentiation.