Ecole Doctorale
Sciences de la Vie et de la Santé
Spécialité
Biologie-Santé - Spécialité Pathologie Vasculaire et Nutrition
Etablissement
Aix-Marseille Université
Mots Clés
neutrophiles,SLC44A2,thrombose,Inflammation,Adhesion,
Keywords
neutrophils,SLC442A2,Thrombosis,Inflammation,Adhesion,
Titre de thèse
SLC44A2: de la thrombose à l'inflammation
SLC44a2: from thrombosis to inflammation
Date
Mercredi 31 Mars 2021 à 13:30
Adresse
27 Boulevard Jean Moulin
13005 Marseille France Salle de visioconférence ou Salle de thèse medecine
Jury
Directeur de these |
M. Pierre-Emmanuel MORANGE |
Aix-Marseille Univ, INSERM, INRAE, C2VN, Marseille, France. APHM, CHU de la Timone, Laboratoire d'hématologie, Marseille, France |
CoDirecteur de these |
Mme Grace THOMAS |
Aix-Marseille Univ, INSERM, INRAE, C2VN, Marseille, France, |
Examinateur |
Mme Marie-Christine ALESSI |
Aix-Marseille Univ, INSERM, INRAE, C2VN, Marseille, France. APHM, CHU de la Timone, Laboratoire d'hématologie, Marseille, France |
s1176 Université Paris Saclay |
Cecile DENIS |
INSERM UMRS |
S1148, Paris Cedex, France. |
Benoit HO-TIN-NOE |
Université de Paris, INSERM UMR |
Résumé de la thèse
Des études d'association pangénomiques ont lié le polymorphisme SLC44A2 rs2288904 (461G> A) à la thrombose veineuse (TV) chez l'homme. Elle conduit à l'expression de l'épitope HNA-3a (human neutrophil antigen-3a) ou HNA-3b par Slc44a2, HNA-3b étant protecteur contre la TV. Slc44a2 est une protéine transmembranaire ubiquitaire et un récepteur du facteur von Willebrand (FVW), une protéine exprimée par lendothélium inflammé. Le but de ce travail était de déchiffrer les mécanismes liant SLC44A2 à la TV en utilisant des modèles in vivo et in vitro. Nous avons observé que la déficience en Slc44a2 ninfluençait pas la thrombose dans un modèle murin dhypercoagulabilité. Par contre, les souris SLC44A2-/- avaient des thrombi significativement plus petits en comparaison avec les souris sauvages dans un modèle de TV dépendent des neutrophiles. Nous avons testé si Slc44a2 pouvait influencer le recrutement et/ou lactivation des neutrophiles à la paroi vasculaire, une étape importante dans linitiation de la TV. Des cellules HEK293T transfectées ou des neutrophiles homozygotes pour l'allèle codant HNA-3a ou HNA-3b ont été perfusés sur du FVW à des taux de cisaillement veineux. L'expression de HNA-3a sest révélée importante pour ladhésion du neutrophile au FVW. Cette adhésion était amplifiée quand les neutrophiles étaient pré-activés avec des lipopolysaccharides. Des conditions de cisaillement spécifiques et une concentration élevée de neutrophiles ont agi comme un « 2ème hit » induisant la formation de « neutrophil extracellular traps ». Limportance de Slc44a2 dans le processus de recrutement des neutrophiles a été ensuite confirmé par microscopie intravitale sur veinules de souris après dégranulation endothéliale. Les souris déficientes en Slc44a2 ont présenté une réduction massive du recrutement des neutrophiles à la paroi vasculaire. En montrant que Slc44a2/HNA-3a est crucial pour ladhésion et lactivation des neutrophiles dans les veines sous inflammation et taux de cisaillements spécifiques, ce travail propose de nouvelles perspectives mécanistiques reliant linflammation à la TV.
Thesis resume
Genome wide association studies linked the SLC44A2 rs2288904 (461G>A) polymorphism to venous thrombosis (VT) in humans. It leads to the expression of the human neutrophil antigen (HNA)-3a or HNA-3b on Slc44a2, HNA-3b being protective from VT. Slc44a2 is a ubiquitous transmembrane protein and a receptor for von Willebrand factor (VWF), a protein expressed by the inflamed endothelium. The aim of this work was to unravel the mechanisms linking SLC44A2 to VT using both in vitro and in vivo models. We have observed that Slc44a2 deficiency had no effect on thrombosis in a hypercoagulability mouse model. However, SLC44A2-/- mice had significantly smaller thrombi than wild type mice in a VT mouse model where thrombosis is neutrophil-dependent. We verified the involvement of Slc44a2 in neutrophil recruitment and/or activation at the vessel wall, which is crucial for VT initiation. Transfected HEK293T or neutrophils homozygous for the HNA-3a or the HNA-3b-coding allele were perfused in flow chambers over VWF at venous shear rates. HNA-3a-expression was required for neutrophil adhesion on VWF. This adhesion was enhanced when neutrophils were activated with lipopolysaccharide. Specific shear conditions, high neutrophil concentration worked like a second hit, inducing the formation of neutrophil extracellular traps. The importance of Slc44a2 in the neutrophil recruitment process was then confirmed in mice by intravital microscopy done on mesenteric venules after endothelial degranulation. Mice deficient in Slc44a2 showed a massive reduction in neutrophil recruitment at the vessel wall. By showing that Slc44a2/HNA-3a is crucial for the adhesion and activation of neutrophils in veins during inflammation and when submitted to specific shears, this work proposes new mechanistic insights linking inflammation to VT.