Madame Emilie COPPIN / Docteur

Le travail de ce projet sera de réaliser de véritables cartes d'identité des cellules présentes dans la moelle osseuse et le sang des patients atteints de Leucémie Myélomonocytaire Chronique (LMMC), à la fois au niveau des cellules tumorales et des cellules immunitaires (en particulier des cellules Natural Killer (NK)). L'approche technologique est la cytométrie de flux permettant l'analyse de ces cellules au niveau unicellulaire. Les cellules NK chez les patients atteints de LMMC semblent inefficaces, l'analyse de l'expression des récepteurs activateurs et inhibiteurs à la surface de ces cellules sera donc réalisée. Récemment cette approche par cytométrie de flux a permis d'analyser des évènements intracellulaires tels que les signaux de transduction (Gary Nolan – Stanford). Cette technique a été optimisée par le laboratoire (technique de 'phosphoflow dynamique') pour pouvoir l'adapter au travail de la recherche d'évènements de signalisation dans les cellules leucémiques. Après isolement des cellules du sang périphérique ou de la moelle osseuse des patients, la nature des signaux intracellulaires dans les cellules leucémiques et les cellules environnantes sera analysée, grâce à l'utilisation d'anticorps anti-phosphoprotéines intracellulaires, indicateurs de l'état d'activation des grandes voies de signalisation conduisant à la prolifération et la survie cellulaire. Les voies Ras/MAP Kinases, PI-3 kinases/Akt et JAK/STATs seront analysées et pourront être ciblées par des inhibiteurs pharmacologiques déjà utilisés dans d'autres pathologies. Suite à cette étape de caractérisation et de stratification des patients des études fonctionnelles seront réalisées: - Sur les cellules leucémiques. Il s'agira de démontrer que sur une cellule où un évènement de signalisation s'est révélé positif, un inhibiteur spécifique de cet évènement est bien en mesure de bloquer ce signal activateur et que ce traitement entraîne la mort de la cellule leucémique ex vivo. -Sur les cellules NK. Il s'agira de vérifier l'état fonctionnel de ces cellules sur le plan de leur capacité cytotoxique et à produire des cytokines. Dans le cas où les cellules seraient fonctionnellement déficientes, un traitement cytokinien ex vivo de ces cellules sera réalisé pour essayer de corriger ces défauts. Les études phénotypiques et fonctionnelles définies dans ce projet seront couplées à une analyse de l'expression génique dans les cellules leucémiques afin de pouvoir définir de nouvelles signatures moléculaires. Un séquençage de certains gènes qui pourraient être impliqués dans la leucémogenèse sera réalisé. Les souris Dok DKO développent un syndrôme myéloprolifératif à l'age de 7-8 mois. Les caractéristiques de ces désordres chez la souris correspondraient à une LMMC chez l'homme. Ce point primordial reste à vérifier chez les patients atteints de LMMC. Un défaut de transmission de signal via les molécules Dok-1 et Dok-2 induit une augmentation de l'activation de la voie ERK/ MAP kinase. L'état d'activation de la voie ERK chez les patients atteints de LMMC sera investigué et les gènes DOK1 et DOK2 seront séquencés. Sur la base de ce travail, nous pourrons proposer l'utilisation de certains inhibiteurs dans le traitement des LMMC. En effet, il est reconnu que la voie PI-3 kinase/Akt est une voie d'activation qui est couramment activée dans les cancers, impliquée dans la survie des blastes leucémiques. Le département d'hématologie de l'IPC doit participer à une phase III dans le traitement du myélome multiple avec un inhibiteur d'Akt : la périfosine. Si nous identifions un nombre suffisant de patients (n=15) où cette voie de signalisation est activée et que cette voie est inhibée ex vivo par cet inhibiteur d'Akt, nous avons des arguments solides pour réaliser une phase I avec cette inhibiteur dans la LMMC à Marseille. Dans le cadre de ce projet, nous serons en mesure de suivre l'efficacité de ce médicament, en réalisant des analyses de l'état d'activation d'Akt par cytométrie en flux.