Soutenance de thèse de DAVID--BROGLIO Luc
Titre de thèse
Outils diagnostics pour l'immunologie basés sur la micro-impression d'anticorps
Diagnostic tools for immunology based on micro-printing of antibodies
Résumé de la thèse
Le rôle central des lymphocytes T dans la réponse immunitaire en fait un des types cellulaires les plus étudiés par les cliniciens pour la prise en charge et le diagnostic de maladies comme le cancer ou les immunodéficiences. L'étude des fonctions des lymphocytes T est particulièrement importante, car elle permet d'établir directement les capacités fonctionnelles des cellules en s'affranchissant du fond génétique ou des facteurs environnementaux. Les tests fonctionnels actuellement réalisés par les cliniciens sont longs et coûteux, ce qui restreint leur utilisation. Ce projet de thèse vise à produire un test d'activation pour les lymphocytes T mémoires humains, rapide à réaliser, demandant peu de manipulation des échantillons et peu d'équipement pour l'analyser. Ce test est produit grâce à une méthode innovante d'impression de protéines. Cette méthode d'adsorption de molécules induite par la lumière permet de produire des substrats intelligents capables de capturer, d'activer et de révéler l'activation au niveau de la cellule unique de cellules T mémoires, et ce uniquement par l'adhésion des cellules sur des micro-motifs d'anticorps. Dans ce manuscrit sont d'abord présentées les tentatives d'optimisation, à la fois du protocole de production et de la capacité du test à précisément déterminer le niveau d'expression du marqueur d'activation CD69. Ces travaux ont abouti à une diminution du temps de production du test ainsi qu'à une caractérisation précise des temps d'adsorption des anticorps sur les substrats. Ensuite sont présentés les résultats de l'étude de la performance du test pour discriminer différents niveaux d'activation au travers d'expériences de doses-réponses avec un inhibiteur de l'activation des cellules T. Ainsi, le test a pu démontrer sa capacité à discriminer les cellules inhibées par des doses thérapeutiques de l'inhibiteur utilisé, avec une bonne précision.
Thesis resume
The central role of T lymphocytes in the immune response makes them one of the most studied cell types by clinicians for the management and diagnosis of diseases such as cancer or immunodeficiencies. The study of T lymphocyte functions is particularly important, as it directly establishes the functional capacities of the cells while bypassing genetic background or environmental factors. The functional tests currently performed by clinicians are lengthy and costly, which limits their use. This thesis project aims to develop a rapid activation test for human memory T lymphocytes that requires minimal sample handling and little equipment for analysis. This test is produced using an innovative protein printing method. This light-induced molecule adsorption method allows the production of intelligent substrates capable of capturing, activating, and revealing the activation at the single-cell level of memory T cells, solely through the adhesion of cells on micro-patterns of antibodies. This manuscript first presents the attempts to optimize both the production protocol and the test's ability to precisely determine the expression level of the activation marker CD69. These efforts led to a reduction in the test production time as well as a precise characterization of antibody adsorption times on the substrates. The manuscript then presents the results of the performance evaluation of the test in discriminating different levels of activation through dose-response experiments with a T cell activation inhibitor. Thus, the test was able to demonstrate its capacity to discriminate cells inhibited by therapeutic doses of the inhibitor used, with good precision.