Soutenance de thèse de Amandine BONIFAY

Il est bien connu que la thrombose et l’inflammation sont des réponses biologiques interdépendantes et associées cliniquement, cependant, la compréhension des mécanismes physiopathologiques, qui sous-tendent des réponses thrombo-inflammatoires, débute. Dans ce cadre, les vésicules extracellulaires (VE) sont des éléments submicroniques produits par toutes les cellules de notre organisme, dont la composition en lipide, protéine et acide nucléique les identifie comme des médiateurs des réponses physiopathologiques. Leur rôle dans l’hémostase est complexe, car elles sont le support de réactions procoagulantes et fibrinolytiques, dont la résultante est appelée balance coagulolytique des VE (BCL-VE). L’objectif a été d’approfondir la relation structure/fonction des VE de polynucléaires neutrophiles (PNN), de mieux comprendre le rôle des VE dans la dynamique de formation et de lyse d’un thrombus et de transposer ces connaissances dans le but de les utiliser comme des biomarqueurs dans la prédiction et la stratification du risque thrombotique. Tout d’abord, nous avons pu établir une cartographie antigénique des VE-PNN grâce à un panel d’anticorps couvrant un large répertoire de spécificités, qui combinée à une stratégie originale d’analyse a permis le tri par cytométrie de flux des VE de patients en choc septique. Puis, un modèle utilisant des VE d’une lignée cellulaire génétiquement modifiée pour posséder sélectivement une activité procoagulante ou fibrinolytique nous a permis de démontrer que la BCL-VE contribue in vitro et in vivo à la dynamique de formation et de lyse d’un caillot. De plus, nous montrons que de l’activité procoagulante des VE lié au facteur tissulaire (FT) dans la COVID-19 permet de stratifier les patients en fonction du risque thrombotique. Enfin, la coordination de la première étude multicentrique de comparaison des performances analytiques des tests d’activité procoagulante lié au FT des VE a permis d’établir des recommandations.

It’s well known that thrombosis and inflammation are interdependent and clinically associated biological responses, however, understanding of the pathophysiological mechanisms underlying thrombo-inflammatory responses is just beginning. In this context, extracellular vesicles (EV) are submicronic elements produced by all the cells in our body, whose lipid, protein and nucleic acid composition identifies them as mediators of pathophysiological responses. Their role in haemostasis is complex, as they support procoagulant and fibrinolytic reactions, the result of which is called the EV coagulolytic balance (EV-CLB). The aim was to investigate the structure/function relationship of neutrophil derived-EV (NDEV), to gain a better understanding of the role of EV in the dynamics of thrombus formation and lysis, and to transpose this knowledge with the objective to using them as biomarkers in the prediction and stratification of thrombotic risk. Firstly, we were able to establish an antigenic map of NDEV using a panel of antibodies covering a wide repertoire of specificities, which combined with an original analysis strategy enabled the sorting of EVs from patients in septic shock by flow cytometry. Then, in a model using EV from a cell line genetically modified to selectively possess procoagulant or fibrinolytic activity, we demonstrated that the EV-CLB contributes in vitro and in vivo to the dynamics of clot formation and lysis. In addition, we have shown that the procoagulant activity of EV linked to tissue factor (TF) in COVID-19 makes it possible to stratify patients according to thrombotic risk. Finally, the coordination of the first multicenter study to compare the analytical performance of tests for the FT-linked procoagulant activity of EV has made it possible to draw up recommendations.