Ecole Doctorale

Sciences de la Vie et de la Santé

Spécialité

Biologie-Santé - Spécialité Oncologie

Etablissement

Aix-Marseille Université

Mots Clés

Immunothérapie,Cellule T,Dok,,

Keywords

Immunotherapy,T cell,Dok,,

Titre de thèse

Cibler les protéines inhibitrices intracellulaires DOK1 et DOK2 pour améliorer l'immunothérapie des cellules T CD8 +
Targeting Intracellular Inhibiting proteins DOK1 and DOK2 to improve CD8+ T Cell immunotherapy

Date

Mardi 13 Décembre 2022 à 14:00

Adresse

Centre de Recherche en Cancérologie de Marseille (CRCM) 27 bd Lei Roure, 13009 Marseille Bibliothèque

Jury

Directeur de these M. Jacques NUNES CRCM-Centre de Recherche en Cancérologie de Marseille
Rapporteur Mme Claire HIVROZ Institut Curie-INSERM-Université Paris Sciences et Lettres (PSL)
Rapporteur Mme Loredana SAVEANU Centre de recherches sur l’inflammation (CRI) - Faculté de Médecine Xavier Bichat / INSERM / Université de Paris
Examinateur M. Romain RONCAGALLI Centre d’immunologie de Marseille-Luminy (CIML) – CNRS / Inserm / Université Aix-Marseille, Marseille

Résumé de la thèse

Les stratégies d'immunothérapie anticancéreuse ciblant les cellules T CD8+ cytotoxiques sont très efficaces sur le plan thérapeutique. Cependant, la majorité des patients ne répondent pas aux immunothérapies disponibles. De nouvelles méthodes pour améliorer les thérapies du cancer basées sur les cellules T sont nécessaires. Le sujet de ce travail de thèse vise à élaborer un concept de ciblage de molécules inhibitrices intracellulaire de la signalisation lymphocytaire T comme une stratégie prometteuse en immunothérapie anticancéreuse. Pour preuve de concept, nous avons étudié dans le cadre de ce projet l’impact de la délétion des protéines inhibitrices de la signalisation du récepteur à l’antigène des cellules T (DOK1 et DOK2) sur le phénotype et les fonctions cytotoxiques des lymphocytes T CD8+. Les protéines DOK1 et DOK2 sont deux protéines inhibitrices dans la cascade de signalisation du complexe de récepteur des lymphocytes T (TCR). Elles agissent sur les voies de signalisation Ras-ERK1/2 et PI3K-AKT, deux principales voies impliquées dans prolifération, survie et activités cytotoxiques des lymphocytes T. Par conséquent, l’invalidation d’expression de DOK1 et DOK2 doit améliorer les thérapies contre le cancer basées sur les cellules T CD8+. L’hypothèse de ce travail est que DOK1 et DOK2 représentent des cibles potentielles pour améliorer l’efficacité de l’immunothérapie liée au transfert adoptif de lymphocytes T CD8+. Nous avons montré que la déplétion de DOK1 et DOK2 n’affecte pas le développement, la prolifération, la mortalité, l’activation et la fonction cytotoxique des cellules T CD8+ naïves. Cependant, après la pré-stimulation in vitro, les cellules T CD8+ DOK1/DOK2 KO avaient un pourcentage plus élevé de cellules T à mémoire effectrice ainsi qu’une augmentation des niveaux de pAkt et pErk. Nous avons démontré que malgré le phénotype effecteur et signalisation plus forte les cellules T CD8+ DOK1/DOK2 KO n’avaient pas d’avantage cytotoxique contre la lignée de cellules tumorales. Dans l'ensemble, nous démontrons ici un nouvel aspect de la régulation négative par les protéines DOK1 et DOK2 dans les cellules T CD8+. En conclusion, les protéines DOK1 et DOK2 ont un rôle inhibiteur suite à des stimulations de longue durée des cellules T.

Thesis resume

Cancer immunotherapy strategies targeting cytotoxic CD8+ T cells show high therapeutic potency. However, the majority of patients do not respond to available immunotherapies. New methods to improve T-cell based therapies of cancer are required. The aim of this thesis is to develop a concept of targeting intracellular inhibitory molecules of T cell signaling as a promising strategy in cancer immunotherapy. As a proof of concept, this project investigated the impact of deletion of signaling inhibitory proteins of T cell antigen receptor (TCR) (DOK1 and DOK2) on the phenotype and cytotoxic functions of CD8+ T lymphocytes. DOK1 and DOK2 are two inhibitory proteins in TCR complex signaling cascade. They repress Ras-ERK1/2 and PI3K-AKT signaling pathways, two major pathways involved in T cell cytotoxic activities, proliferation and survival following T cell receptor activation. Therefore, depletion of the intracellular DOK1 and DOK2 inhibition checkpoints should improve CD8+ T cell-based cancer therapies. The hypothesis of this work is that DOK1 and DOK2 represent potential targets for improving of efficacy of CD8+ T cell adoptive transfer immunotherapy. We have shown that depletion of DOK1 and DOK2 does not affect the development, proliferation, mortality, activation and cytotoxic function of naive CD8+ T cells. However, after in vitro pre-stimulation, DOK1/DOK2 KO CD8+ T cells had a higher percentage of effector memory T cells as well as increased levels of pAkt and pErk. We demonstrated that despite the stronger effector phenotype and signaling the CD8+ DOK1/DOK2 KO T cells did not have a cytotoxic advantage against tumor cell line. Overall, we demonstrate here a novel aspect of negative regulation by DOK1 and DOK2 proteins in CD8+ T cells. In conclusion, DOK1 and DOK2 proteins have an inhibitory role following long-term T cell stimulations.